炭素源としてグリセリンを含有する原料を用いてエンテロコッカス フェカリス（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ ｆａｅｃａｌｉｓ）にＬ－乳酸を生産させるに際し、前記エンテロコッカス フェカリスがエンテロコッカス フェカリス Ｗ１１（受託番号ＦＥＲＭ Ｐ－２１９４３）であり、生産させる乳酸がＬ－乳酸のみであり、前記炭素源のうち５０質量％以上がバイオディーゼル廃液由来のグリセリンであることを特徴とする、Ｌ－乳酸の製造方法を提供することによって解決される。